4-nitrofenyl beta-D-galaktopyranosid CAS: 200422-18-0

Effekt: ONPG er et substrat som brukes spesifikt til å detektere tilstedeværelsen og aktiviteten til enzymet β-galaktosidase. Når β-galaktosidase-enzymet er tilstede og aktivt, spalter det ONPG i to produkter: o-nitrofenol og et galaktosederivat. Frigjøringen av o-nitrofenol resulterer i en gul fargeendring, som kan måles ved hjelp av et spektrofotometer.

Anvendelse: ONPG har flere bruksområder innen molekylærbiologi og biokjemiforskning:

Bestemmelse av β-galaktosidaseaktivitet: ONPG brukes ofte til å måle og kvantifisere aktiviteten til β-galaktosidase-enzymet. Hastigheten for dannelse av o-nitrofenol, som er direkte proporsjonal med enzymaktiviteten, kan måles spektrofotometrisk.

Genuttrykk og regulering: ONPG brukes ofte i eksperimenter relatert til genuttrykk og reguleringsstudier. Det brukes ofte i fusjonsproteinanalyser, slik som det vanlige lacZ-fusjonssystemet, for å studere uttrykket av gener under kontroll av spesifikke promotorer. Beta-galaktosidaseaktiviteten målt ved hjelp av ONPG gir innsikt i nivået av genuttrykk.

Screening for β-galaktosidaseaktivitet: ONPG kan brukes som en kolorimetrisk screeningsmetode i rekombinant DNA-teknologi for å identifisere tilstedeværelsen og funksjonaliteten til LacZ-genet, som koder for β-galaktosidase. Denne screeningmetoden bidrar til å identifisere kloner som inneholder genet av interesse.

Studier av enzymkinetikk: ONPG er også nyttig for å studere kinetikken til enzymet β-galaktosidase. Ved å måle hastigheten på enzym-substrat-reaksjonen ved forskjellige substratkonsentrasjoner er det mulig å bestemme kinetiske parametere som Michaelis-Menten-konstanter (Km) og maksimale reaksjonshastigheter (Vmax).