4-nitrofenyl beta-D-galaktopyranosid CAS:200422-18-0

Effekt: ONPG er et substrat som spesifikt brukes til å påvise tilstedeværelse og aktivitet av enzymet β-galaktosidase.Når β-galaktosidase-enzym er tilstede og aktivt, spalter det ONPG i to produkter: o-nitrofenol og et galaktosederivat.Frigjøringen av o-nitrofenol resulterer i en gul fargeendring, som kan måles ved hjelp av et spektrofotometer.

Søknad: ONPG har flere bruksområder innen molekylærbiologi og biokjemiforskning:

Bestemmelse av β-galaktosidaseaktivitet: ONPG brukes vanligvis til å måle og kvantifisere aktiviteten til β-galaktosidaseenzym.Hastigheten for o-nitrofenoldannelse, som er direkte proporsjonal med enzymaktiviteten, kan måles spektrofotometrisk.

Genuttrykk og regulering: ONPG brukes ofte i eksperimenter relatert til genuttrykk og reguleringsstudier.Det brukes ofte i fusjonsproteinanalyser, for eksempel det ofte brukte lacZ fusjonssystemet, for å studere ekspresjonen av gener under kontroll av spesifikke promotere.Beta-galaktosidaseaktiviteten målt ved hjelp av ONPG gir innsikt i nivået av genuttrykk.

Screening for β-galaktosidaseaktivitet: ONPG kan brukes som en kolorimetrisk screeningsmetode i rekombinant DNA-teknologi for å identifisere tilstedeværelsen og funksjonaliteten til LacZ-genet, som koder for β-galaktosidase.Denne screeningsmetoden hjelper til med å identifisere kloner som inneholder genet av interesse.

Enzymkinetikkstudier: ONPG er også nyttig for å studere kinetikken til β-galaktosidase-enzymet.Ved å måle hastigheten på enzym-substratreaksjon ved forskjellige substratkonsentrasjoner, er det mulig å bestemme kinetiske parametere som Michaelis-Menten-konstanter (Km) og maksimale reaksjonshastigheter (Vmax).