Det er mange ubesungne helter rundt oss, som ser ut til å være vanlige, men faktisk bidrar de i det stille mye til oss.Proteinase K er den "ubelyste helten" i molekylærdiagnostikkindustrien, men sammenlignet med de "store og mektige" i industrien er proteinase K så lavmælt at vi lenge har oversett viktigheten.Med utbruddet av den nye kroneepidemien har etterspørselen etter proteinase K skutt, og tilbudet i inn- og utland ligger langt bak forbruket, og alle skjønte plutselig at proteinase K er så viktig.
Hva er bruken av proteinase K?
Proteinase K er en serinprotease med proteolytisk enzymaktivitet og kan opprettholde aktivitet i et bredt spekter av miljøer (pH (4-12,5), høysaltbuffer, høy temperatur på 70°C, etc.).I tillegg hemmes ikke aktiviteten til proteinase K av SDS, urea, EDTA, guanidinhydroklorid, guanidinisotiocyanat osv., og en viss mengde vaskemiddel kan også øke aktiviteten til proteinase K. Ved medisinsk behandling (virus- og mikrobiell desinfeksjon) ), mat (mørning av kjøtt), lær (mykgjøring av hår), vinfremstilling (alkoholklaring), aminosyrepreparat (nedbrutte fjær), nukleinsyreekstraksjon, in situ hybridisering, etc., proteinase K Det finnes bruksområder.Den mest brukte applikasjonen er nukleinsyreekstraksjon.
Proteinase K kan enzymolysere alle slags proteiner i prøven, inkludert de histoner som er tett bundet til nukleinsyrer, slik at nukleinsyrene kan frigjøres fra prøven og frigjøres i ekstraktet, noe som letter neste trinn med ekstraksjon og rensing.Ved påvisning av viral nukleinsyre er proteinase K en av de viktige komponentene i virusprøveløsningen.Proteinase K kan knekke og inaktivere kappeproteinet til viruset, som er tryggere under transport- og påvisningsstadiet;i tillegg kan proteinase K også bryte ned RNase forhindrer nedbrytning av viralt RNA og letter nukleinsyredeteksjon.
Den over natten berømmelse av proteinase K
Enten det er innen vitenskapelig forskning eller innen IVD, er nukleinsyreekstraksjon det mest grunnleggende eksperimentet, så proteinase K har alltid vært en veldig viktig eksistens.Men tidligere var proteinase K langt mindre kjent enn dens rolle.En stor del av dette skyldtes at tilbuds- og etterspørselsforholdet til proteinase K var meget stabilt.De færreste ville tro at tilførselen av proteinase K ville være et problem.
Med utbruddet av den nye kroneepidemien har etterspørselen etter nukleinsyretesting økt.I slutten av juni 2020 har Kina fullført nesten 90 millioner nye kronetester, og dette tallet er enda mer alarmerende på global skala.I nukleinsyreekstraksjonsforsøk er arbeidskonsentrasjonen av proteinase K omtrent 50-200 μg/mL.Vanligvis tar det omtrent 100 μg proteinase K for å trekke ut en prøve av nukleinsyre.Ved faktisk bruk, for å øke effektiviteten av nukleinsyreekstraksjon, vil ofte Proteinase K bli brukt i økt mengde.Nukleinsyredeteksjon av det nye koronaviruset har ført til en stor mengde proteinase K-etterspørsel.Den opprinnelige balansen mellom tilbud og etterspørsel av proteinase K ble raskt brutt, og proteinase K ble et viktig epidemisk forebyggende materiale over natten.
Vanskeligheter i produksjonen av proteinase K
Selv om med utviklingen av epidemien, den viktige verdien av proteinase K har blitt verdsatt av folk, er det pinlig at på grunn av den overdreven lavmælte proteinase K, har få innenlandske selskaper vært involvert i produksjonen av proteinase K. Når mennesker ønsker å etablere proteinase K-produksjon Under produksjonsprosessen ble det oppdaget at proteinase K er et ekstremt spesielt protein.Det er ekstremt utfordrende å utvide produksjonskapasiteten til proteinase K på kort tid.
Den storskala produksjonen av proteinase K står overfor følgende vanskeligheter
1. Lavt uttrykk
Proteinase K kan ikke-spesifikt bryte ned de fleste proteiner og forårsake alvorlig toksisitet for ekspresjonsvertscellen.Derfor er ekspresjonsnivået av proteinase K generelt veldig lavt.Screening av ekspresjonssystemer og stammer som i høy grad uttrykker proteinase K krever generelt en lengre syklus.
2. Rester av pigmenter og nukleinsyrer
Storskala fermentering introduserer en stor mengde pigment- og vertsnukleinsyrerester.Det er vanskelig å fjerne disse urenhetene med en enkel renseprosess, og kompleks rensing øker kostnadene og reduserer utvinningsgraden.
3. Ustabilitet
Proteinase K er ikke stabil nok, den kan enzymolysere seg selv, og det er vanskelig å lagre den stabilt ved 37°C over lengre tid uten et beskyttelsesmiddel.
4. Lett å felle ut
Ved fremstilling av det frysetørkede pulveret av proteinase K, for å sikre at faststoffinnholdet av proteinase K i det frysetørkede pulveret er stort, er det nødvendig å tilsette et frysetørket beskyttelsesmiddel i høy konsentrasjon, men når konsentrasjonen av proteinase K når 20mg/mL og over, er det enkelt. Aggregeringen danner et bunnfall, noe som medfører store vanskeligheter ved frysetørking av proteinase K med høyt faststoffinnhold.
5. Stor investering
Proteinase K har sterk proteaseaktivitet og kan hydrolysere andre proteaser i laboratoriet.Derfor krever proteinase K spesialiserte produksjonsområder, utstyr og personell for forskning og utvikling og produksjon.
XD BIOCHEM sin proteinase K-løsning
XD BIOCHEM har en moden proteinekspresjons- og renseplattform, og har rik erfaring med ekspresjon og rensing av rekombinante proteiner og optimalisering av produksjonsprosesser.Gjennom den raske dannelsen av et forsknings- og utviklingsteam har den storskala produksjonsprosessen av proteinase K blitt overvunnet.Den månedlige produksjonen av frysetørket pulver er mer enn 30 kg.Produktet har stabil ytelse, høy enzymspesifikk aktivitet og ingen vertscytokrom- og nukleinsyrerester.Velkommen til å kontakte XD BIOCHEM Få en prøvepakke (E-post:sales@xdbiochem.comTlf.: +86 513 81163739).
XD BIOCHEMs tekniske løsninger inkluderer
Ved å bruke multi-kopi plasmidintegrasjon velges høyekspresjonsstammer med et ekspresjonsnivå på 8g/L, noe som overvinner problemet med lavt ekspresjonsnivå av proteinase K.
Gjennom etableringen av en flertrinns renseprosess ble vertscytokrom- og nukleinsyrerestene av proteinase K vellykket fjernet under standardverdien.
Gjennom high-throughput screening av beskyttende bufferformuleringer ble en buffer som stabilt kan lagre proteinase K ved 37°C valgt.
Screeningbuffere overvinner problemet med at proteinase K er lett å aggregere og utfelle ved høye konsentrasjoner, og legger grunnlaget for proteinase Ks høye faststoffinnhold frysetørking.
XD BIOCHEM proteinase K prøve
XD BIOCHEM proteinase K stabilitetstest: det vil ikke være noen signifikant endring i aktivitet etter 80 dager ved romtemperatur
XD BIOCHEM proteinase K stabilitetstest: det vil ikke være noen signifikant endring i aktivitet etter 80 dager ved romtemperatur.
Sammenligning av nukleinsyreekstraksjonseffekten til XD BIOCHEM proteinase K og konkurrerende produkter.I prosessen med nukleinsyreekstraksjon brukes henholdsvis XD BIOCHEM og konkurrerende proteinase K.Ekstraksjonseffektiviteten til XD BIOCHEM proteinase K er høyere og Ct-verdien til målgenet er lavere.
Innleggstid: 31. desember 2021