Hvordan bestemme den optimale konsentrasjonen?
For induktoren IPTG (isopropyl-beta-d-tiogalaktosid), jo høyere konsentrasjon, jo bedre.Den optimale konsentrasjonen avhenger av de spesifikke eksperimentelle forholdene og ønsket induksjonseffekt.
Generelt brukes konsentrasjonen av IPTG i området 0,1-1 mM.Lavere konsentrasjoner kan redusere negative effekter på cellevekst og kan redusere cytotoksisitet på grunn av overekspresjon av målproteiner.Høyere konsentrasjoner kan forårsake overdreven cellemetabolsk belastning, som påvirker cellevekst og ekspresjonseffektivitet.
Måten å bestemme den optimale konsentrasjonen på kan være å evaluere ekspresjonsnivået til målproteinet ved å utføre IPTG-induksjonstester ved forskjellige konsentrasjoner.Småskala kulturtester kan utføres ved å bruke en rekke IPTG-konsentrasjoner (f.eks. 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM, etc.), og ekspresjonseffekten ved forskjellige konsentrasjoner kan evalueres ved å detektere ekspresjonsnivået til målproteinet (f.eks. Western blot eller fluorescensdeteksjon).I følge forsøksresultatene ble konsentrasjonen med best ekspresjonseffekt valgt som optimal konsentrasjon.
I tillegg kan du også referere til relevant litteratur eller erfaring fra andre laboratorier for å forstå det vanlig brukte IPTG-konsentrasjonsområdet under lignende eksperimentelle forhold, og deretter optimalisere og justere i henhold til de eksperimentelle behovene.
Det er viktig å merke seg at den optimale konsentrasjonen kan variere avhengig av forskjellige ekspresjonssystemer, målproteiner og eksperimentelle forhold, så det er best å optimalisere fra sak til sak.
Innleggstid: 28. september 2023